農藥殘留儀測試要點

一、農藥分類
農藥是用于防治危害農作物及農副產品的病蟲害、雜草及其他有害生物的化學藥劑的統稱。其分類方法有多種，常見的幾種分類如下：
1、 根據防治對象的不同，分為殺蟲劑、殺螨劑、殺菌劑、除草劑、殺鼠劑等。常將防治害蟲的稱為殺蟲劑，防治紅蜘蛛的稱為殺螨劑，防治作物真菌、細菌及病毒的稱為殺菌劑，防治雜草的稱為除草劑，防治鼠類的稱為殺鼠劑。
2、 根據農藥的作用方式分為胃毒劑、觸殺劑、熏蒸劑、內吸劑、引誘劑、驅避劑、拒食劑、不育劑等。
3、 根據農藥的化學組成和結構可分為有機農藥和無機農藥兩大類。農藥中除少部分的無機物外，大部分都為有機化合物，其中有元素有機化合物、金屬有機化合物及一般有機化合物之分。我們所測試的有機磷屬于元素有機化合物之類。
另外還有根據農藥的來源、農藥的使用方法、防治原理等來分類。
二、生化分析適用于什么農藥
絕大多數化學農藥之所以能殺蟲、螨、或者有效的主要原因就在于它們對生物內的靶酶有不同程度的抑制作用。因此，利用生化分析測試的農藥應該是生物體內某種酶的抑制劑（激活劑），使得這些酶失去正常的生理作用，從而使生物表現出中毒的癥狀。當然，基于目前的研究水平，有些農藥雖然知道它對某種酶有不利的影響，但是該酶的提取，保存等因素的原因也制約著用生化方法來測試該種農藥。所以雖然生物體內酶的種類很多，化學農藥作用原理也大多基于對生物體內酶的作用，但利用生化分析的農藥種類并不多。
三、測試農藥殘留有哪些方法
農藥殘留的測試方法，總的來說可以分為常規測試方法和速測方法。常規的測試方法有氣
象色譜、凝膠色譜及薄層色譜法。這些方法都是利用農藥在不同載體中的分配系數不同而得到分離，從而定性和定量來測試農藥的種類及含量。速測方法主要有速測卡法和酶抑制率法兩種。無論是速測卡法還是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。
四、乙酰膽堿酯酶對乙酰膽堿的作用原理
乙酰膽堿酯酶和乙酰膽堿作用時，首先形成一個酶底物的絡合物，接著乙酰膽堿上的酰基轉移到酶分子上,形成乙酰化酯酶。乙酰化酯酶很不穩定，極易水解，其半衰期約為0.1毫秒。乙酰化酯酶水解后又釋放出酶分子，從而使酶復活，再循環利用。
五、有機磷及氨基甲酸酯類農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制過程，什么是可逆抑制
有機磷及氨基甲酸酯類農藥是乙酰膽堿酯酶的底物膽堿酯的結構類似物。它們同乙酰膽堿酯酶作用時，首先形成非共價的中間復合物，然后被水解，水解的同時，磷酰基與膽堿酯酶活性中心絲氨酸羥基作用生成以共價結合的磷酰化酶。磷酰化酶中的磷酰化基很難水解，所以磷酰化酶很穩定，其穩定性是乙酰化酶的107倍以上。因此，可以說有機磷對乙酰膽堿酯酶的抑制是不可逆的。不可逆抑制是指抑制劑與酶分子上的某些基團以牢固的共價鍵結合使酶失活，它的特點是隨時間的延長會逐漸的增加抑制，最后達到完全抑制。而可逆抑制是指抑制劑與酶分子結合是可逆的，不會產生不可逆的共價修飾等作用。
六、米氏常數的含義
米氏常數km表示酶與底物的復合物的離解常數，每一種酶對于特定的底物，都有自己特定的km。1/km稱為酶與底物結合的親和常數。米氏常數也可以定量為在一定的酶濃度下，酶觸反應速度為最大反應速度一半時底物的濃度。
七、預反應過程中，影響農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的因素
農藥對乙酰膽堿酯酶的抑制率的大小主要取決于農藥的分子結構。當農藥分子中含有起作用的強吸電子基團時，磷酰基與乙酰膽堿酯酶的絲氨酸羥基就愈容易結合，在一定時間內，抑制率就愈大。當然，對于一定的農藥，在預反應中，抑制環境溫度和抑制時間及農藥濃度等都是影響抑制率大小的因素。所以在預反應中，應盡可能地保證環境溫度、抑制時間以及農藥濃度的一致。有些農藥剛配制好時測試的抑制率較大，幾天后同樣農藥同樣條件再測試時可能抑制率又降低，這就是因為部分農藥已經降解，起不到抑制作用所致。
八、預反應結束后，影響抑制率測定的因素
酶抑制率法測試農藥殘留的過程中，預反應完成后，再加入底物進行顯色反應。測試根據為體系中顏色變化的情況來決定抑制率的大小。所以在測試一批待測樣時，加入底物和上機測試的過程應盡量快，且加入底物的量一定要一致，也不得有任何溶液的損失，否則測出的數據時不可靠的。
九、試樣提取中應該注意些什么
有些果蔬如蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇、番茄等中含有對酶有影響的植物次生質，有些蔬菜中葉綠素的含量太高，影響比色反應。所以對于以上種類的果蔬，應盡可能的采取整株（體）浸提的辦法來消除干擾。另外，由于同一株（個）待測樣品，其不同部位的農藥含量不同，因此，進行重復性測試時，最好為同一個待測液的不同次數測定，否則可能會出現因取樣不同出現重現性不好的情況。
十、藥劑應怎樣保存
酶抑制率測試法所用的試劑大多為生化試劑，因此它們的保存條件較為苛刻。對于粉劑化的酶及底物應保存在-20℃環境中。對于已經配制成溶液的藥劑如酶液、底物溶液、顯色劑溶液等應置于0-4℃環境中保存。而浸提劑無論配制成溶液與否，在常下密封保存即可。
十一、國家對農藥殘留速測有哪些指標，其測試方法有哪幾類
目前國家對農藥殘留速測出臺的標準有《中華人民共和國國家標準》和《中華人民共和國農業行業標準》兩個標準。這兩個標準規定了測試結果的判斷標準及以及常見農藥如甲胺磷、氧化樂果、克百威、敵敵畏等農藥的最低檢出限。不同的標準，根據所用酶的種類及方法，規定的各種農藥的檢出限量和判斷標準也不同。例如，農業行業標準判斷依據為抑制率大于70%時不合格，而國標有規定抑制率大于50%為不合格，有規定吸光度值大于0.9為不合格。兩種標準所使用的方法都是利用酶被農藥抑制，活性降低原理。其中國家標準中，有使用乙酰膽堿酯酶，也有使用植物酯酶?面粉酶，而行業標準則使用的是丁酰膽堿酯酶。

附：無公害蔬菜中幾種典型農藥的最大農藥殘留限量
不同的農藥，其在不同的蔬菜品種中的允許最大殘留量是不同的，下面是DB35/432-2001中規定的幾種農藥在蔬菜中的殘留限量。
農藥名稱 作物 最高殘留限量（mg/kg）
甲胺磷 蔬菜 不得檢出
克百威 蔬菜 不得檢出
氧化樂果 蔬菜 不得檢出
敵敵畏 蔬菜 0.2
敵百蟲 蔬菜 0.1
樂果 蔬菜 1.0
毒死蟬 芹菜 0.05
番茄 0.5
辣椒 0.5
茄子 0.2
菜豆 0.2
菜花 0.05